ABSTRACT
No Brasil, a Leishmaniose visceral (LV) é causada por Leishmania infantum e tem como seu principal vetor Lutzomyia longipalpis, e o cão como reservatório no ambiente doméstico e peridoméstico. Na tentativa de interromper o ciclo de transmissão e diminuir a prevalência da LV, são recomendados o recolhimento e a eutanásia dos cães infectados por L. infantum. No entanto, essa prática parece não estar sendo efetiva para a diminuição do número de casos e para a preservação de áreas não endêmicas, o que causa grande incomodo social. Autores sugerem que uma das medidas eficazes para o controle da leishmaniose visceral canina (LVC) seria o desenvolvimento de uma vacina efetiva. No Brasil, existem duas vacinas anti- LVC (Leishmune® e a Leish-Tec®). Porém, o Ministério da Saúde não recomenda o seu uso como forma de controle da LV, uma vez que os estudos de eficácia ainda são preliminares. O objetivo deste trabalho foi avaliar os padrões imunológicos de 28 cães imunizados com as vacinas Leish-Tec® ou Leishmune®, acompanhados durante um ano após o protocolo vacinal e comparar com a resposta de 18 cães naturalmente infectados. A avalição de resposta humoral foi realizada por meio do estudo da soroconversão dos cães imunizados utilizando-se os testes DPP® LVC e ELISA LVC fornecidos pelo Ministério da Saúde, além da avaliação da indução de IgG total, IgG1 e IgG2 específicas para as proteínas indutoras de cada vacina FML (Leishmune®) e A2 (Leish Tec®) e ao extrato total de promastigota de L. infantum nos cães imunizados e naturalmente infectados
Por meio da técnica de citometria de fluxo foram avaliados os fenótipos de linfócitos T e linfócitos B ex vivo, no sangue periférico dos cães em diferentes tempos após a vacinação em comparação com cães naturalmente infectados. Foi avaliada também a produção de citocinas pelas células mononucleares do sangue periférico após estimulo com extrato total de promastigota de L. infantum pela técnica de Luminex®. Observamos que os cães vacinados, seja com Leishmune® ou Leish-Tec®, não soroconverteram com os testes do Ministério da Saúde, sugerindo que a metodologia com DPP- LVC e ELISA é sensível e específica, sendo capaz de discriminar os cães verdadeiramente positivos para LVC daqueles imunizados. O nível de reatividade no soro dos animais vacinados com Leishmune® ou Leish-Tec® frente ao FML e a proteína A2, respectivamente foram altos. Com relação a avaliação dos fenótipos celulares observamos que, os animais naturalmente infectados com sinais clínicos, apesar de possuírem um percentual mais elevado de linfócitos T CD8+ no sangue periférico, apresentam uma diminuição no fenótipo de células CD8+ ativadas (CD8+CD25+) quando comparados aos grupos imunizados. Quanto à produção de citocinas, foi observado que os cães imunizados ou naturalmente infectados produziram citocinas pró e anti-inflamatórias, mas que não se mantiveram por 12 meses. O padrão de resposta imunológica celular ou humoral foi semelhante nos cães vacinados com a Leishmune® ou Leish-Tec®, entretanto não há indícios suficientes, até o momento, para o uso das vacinas como controle da LV. Estudos com cães de áreas não endêmicas, com as vacinas estudadas e novas proteínas vacinais são fortemente recomendadas. (AU)
Subject(s)
Animals , Vaccines , Public Health , Diagnosis , Dogs , Immunity , Leishmaniasis, VisceralABSTRACT
ABSTRACT: The objective of the current research was to assess seroconversion in dogs immunized with Leishmune® and Leish Tec® vaccines using rapid chromatographic immunoassay DPP® (Dual Path Platform) (DPP CVL) and enzyme immunoassay (EIE) up to one year after the vaccination protocol. The study sample comprised 28 dogs divided into two groups, each group immunized with an anti-CVL vaccine and clinically monitored for one year through clinical evaluation and laboratory tests. 22 (78.5%) dog were monitored. During the evaluation time (T1-30 days, T2-6 months, and T3-1 year after vaccination) the results for all dogs were negative for CVL, except for one animal vaccinated with Leish tec® that seroconverted in the DPP CVL test at T2. Subsequent examinations of this dog were negative. Our results showed that in a non-endemic area, even at different evaluation times, dogs vaccinated against CVL with Leishmune® or Leish tec® did not seroconvert in the serological protocol used by the Brazilian Ministry of Health (DPP/EIE).
RESUMO: O objetivo deste trabalho foi avaliar a soroconversão em cães imunizados com as vacinas Leishmune® e Leish tec®, através do teste imunocromatográfico rápido DPP® (Dual Path Platform) (DPP LVC) e do ensaio imunoenzimático (EIE) durante um ano após o protocolo vacinal. Trata-se de um estudo onde 28 cães divididos em dois grupos foram imunizados cada um com uma vacina anti - LVC e acompanhados durante um ano através de avaliação clínica e exames laboratoriais. Foi possível acompanhar 22 (78.5%) cães. Nos exames dos tempos 1, 2 e 3 (respectivamente 30 dias, 6 messes e 1 ano após a vacinação) os resultados de todos os cães também foram negativos para LVC, exceto de um cão que recebeu a vacina Leish tec® e soroconverteu no DPP LVC no T2, após 6 meses a vacina. Os exames posteriores deste cão foram negativos. Os resultados do presente estudo demostraram que, em área não endêmica e mesmo em diferentes tempos de avaliação, cães vacinados contra LVC, independente da vacina utilizada, não foram capazes de soroconverter no protocolo utilizado pelo Ministério da Saúde brasileiro (DPP/EIE).
ABSTRACT
A leishmaniose visceral (LV) representa um importante problema de saúde pública no Brasil.Podem acometer os seres humanos e mamíferos silvestres e domésticos, sob a forma de doenças infecciosas crônicas com uma ampla gama de manifestações clínicas. O diagnóstico laboratorial é requerido para confirmar a suspeita clínica. Atualmente as técnicas moleculares baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm demonstrado alta especificidade e sensibilidade. Na literatura existem diversos relatos da utilização da PCR com diferentes tipos de material clínico, alvos moleculares, conservação das amostras. Alguns autores consideram amostras congeladas mais vantajosas em relação às amostras fixadas em formol e em bebida sem parafina (FFPE). No entanto, muitos pesquisadores defendem a importância das amostras FFPE devido à facilidade de conservação e possibilidade de utilização da PCR em estudos retrospectivos. O objetivo desse projeto foi avaliar a acurácia da qPCR realizada em amostras de pele íntegra congelada e parafinada. Trata-se de um estudo de validação, com 50 amostras de tecido congelado e 50 de tecido parafinado, provenientes de cães da cidade de Belém-PA.De cada animal foram coletados fragmentos de pele íntegra, sendo um dos fragmentos congelado e outro conservado por parafinização. As amostras de pele íntegra analisadas foram coletadas da região escapular utilizando punch de 3 mm. A qPCR foi orientada para alvos dokDNA da espécie Leishmania infantum...
Visceral leishmaniasis (VL) is a significant public health problem in Brazil. It affects humans,wild and domestic mammals, in the form of chronic infectious disease with a wide range of clinical manifestations. Laboratory diagnosis is required to confirm the clinical suspicion ofVL. Currently, molecular techniques based on polymerase chain reaction (PCR) have shownhigh specificity and sensitivity. Some authors consider more advantageous the use of frozensamples in PCR due to the better quality of DNA, in relation to that of fixed in formalin andembedded in paraffin (FFPE) samples. However, many researchers argue describe the importance of FFPE samples, due to the facility of conservation and the possibility of usingPCR in retrospective studies. The aim of this study was to evaluate the accuracy of the quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on intact frozen and FFPE skin samples. This is a validation study with 50 fresh tissue samples and 50 FFPE tissues of dogsfrom Belém-PA. From each animal fragments of intact skin were collected, being one of the frozen fragments and another saved by paraffinization. The samples analyzed were collectedfrom intact skin of the scapular region using a 3 mm punch. The qPCR was oriented targetskDNA of Leishmania infantum...
Subject(s)
Dogs , Dogs/parasitology , Leishmania infantum , Leishmaniasis, Visceral/diagnosis , Polymerase Chain Reaction , FluorometryABSTRACT
In Brazil, American visceral leishmaniasis (AVL) is caused by Leishmania (Leishmania) chagasi and its main vector is Lutzomyia longipalpis. Cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) in non-endemic areas have been reported over the last few years throughout the country. The objective of this research note is to describe an autochthonous case of CVL that occurred in the municipality of Volta Redonda, state of Rio de Janeiro, an area where the disease is not endemic, alerting veterinarians and the scientific community to the expansion of this important zoonosis and advising veterinary practitioners on how to deal with a suspicion of CVL. Canine visceral leishmaniasis can be misdiagnosed within a broad spectrum of canine diseases based on clinical and laboratory findings. Therefore, knowledge of its clinical manifestations, specific and sensitive laboratory diagnostic tests and parasitological procedures are of the utmost importance for rapid confirmation and notification of a case, thus contributing directly to the control of a focus.
No Brasil a leishmaniose visceral americana (LVA) é causada por Leishmania (Leishmania) chagasi e tem como seu principal vetor Lutzomyia longipalpis. Nos últimos anos vêm sendo relatados casos de leishmaniose visceral canina (LVC) em áreas não endêmicas em todo país. O objetivo desta nota é descrever um caso autóctone de LVC no município de Volta Redonda, Estado do Rio de Janeiro, área não endêmica para essa doença e assim, chamar a atenção dos clínicos veterinários e da comunidade científica para a expansão dessa importante zoonose, além de orientar os médicos veterinários, como proceder frente a um caso suspeito de LVC. A LVC pode ser clínica e laboratorialmente confundida com uma ampla gama de patologias caninas e o conhecimento de suas manifestações clínicas e de procedimentos laboratoriais específicos e sensíveis para esse diagnóstico, são de grande importância para uma rápida confirmação e notificação do caso, contribuindo assim diretamente para o controle do foco.